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Los lepidópteros nocturnos constituyen un grupo de gran relevancia ecológica debido a su diversidad y sensibilidad a las condiciones del hábitat, por lo que son ampliamente utilizados en estudios de biodiversidad y evaluación ambiental. El objetivo de este estudio fue comparar la diversidad, estructura y composición de lepidópteros nocturnos en dos localidades rurales de Panamá: La Ocho (Tortí, distrito de Chepo) y Arenal (Río Congo Arriba, distrito de Santa Fe). Se realizaron muestreos nocturnos mediante atracción lumínica utilizando luz blanca y azul sobre una manta blanca, entre junio y agosto de 2019. La diversidad se evaluó mediante los índices de Shannon–Wiener y Simpson, y la similitud entre sitios se estimó mediante el coeficiente de Jaccard. Se registró una mayor riqueza y diversidad de especies en la localidad de Arenal, la cual presentó valores más altos del índice de Shannon y menor dominancia en comparación con La Ocho. La similitud entre ambos sitios fue baja, lo que indica diferencias marcadas en la composición de especies. Las curvas de rarefacción por individuos respaldaron estos resultados, mostrando una mayor riqueza esperada en Arenal. Los resultados evidencian que las comunidades de lepidópteros nocturnos difieren significativamente entre localidades y reflejan la influencia de las condiciones del hábitat, destacando la utilidad de este grupo como indicador ecológico en ambientes rurales tropicales.