El objetivo de esta investigación fue evaluar Listeria spp. en muestras ambientales tomadas dentro de una empresa de producción artesanal de quesos frescos blancos, ubicada en la Provincia de los Santos, durante los meses de diciembre de 2008 a marzo de 2009. Las muestras fueron tomadas por triplicado en dos sitios de las zonas de contacto directo y dos sitios de contacto indirecto con el alimento. De las 72 muestras evaluadas, el 70% fueron positivas para Listeria spp. encontrándose diferencias altamente significativas al 99% de probabilidad estadística, en la cuantificación entre las zonas de contacto directo (46.7%), e indirecto (36.3%), con el alimento. En los aislamientos no se detectó Listeria monocytogenes, en ninguna de las muestras positivas para Listeria spp., pero se detectaron otras especies de Listeria, que fueron L. seeligeri, L. grayi y L. welshimeri, demostrando estos resultados que Listeria monocytogenes podría aparecer con la probabilidad de formar reservorios potenciales, como biopelículas.